Ny fitsipika fototry ny ADN synthesis

Ny synthesis ADN simika dia mifototra amin'ny paikady synthesis solid-phase sy simia phosphoramidite.Tsy mitovy amin'ny biolojika ADN synthesis, ny fitaovana amin'ny simika ADN synthesis dia DMT (4, 4-dimethoxytrityl) sy phosphoramidite novaina deoxyriboxyside, araka ny hita ao amin'ny sary 1. Ny ADN synthesis dia tanterahina amin'ny fanohanana mafy (afaka manolotra isan-karazany nyTsanganana Oligo Synthesis), izany hoe CPG (vera maloto voafehy) sy PS (polystyrène), ary ny synthesis manontolo dia atao amin'nyADN/RNA synthesizer, izay fitaovana fototra ananantsika, dia manana modely samihafa toy ny: HY Single Channel Synthesizer, HY-12, HY-192 sy ny sisa, ny lalana synthesis dia avy amin'ny 3 'hatramin'ny 5', ary ny nucleotide dia ampidirina amin'ny fanohanana mafy amin'ny alàlan'ny iray tsingerin'ny synthesis.Ny tsingerin'ny synthesis mahazatra dia misy dingana efatra, Deprotection, Coupling, Capping ary Oxidation (sary 2).Ny Deprotection dia napetraka hanesorana ny vondrona DMT amin'ny fanohanana mafy na ny vondrona hydroxyl 5' amin'ny nucleoside teo aloha, ny asidra trichloroacetic 3% ao amin'ny dichloromethane dia ampiasaina ho toy ny reagent deprotection.Avy eo ny deoxyriboxyside niova fo phosphoramidi dia navela hanambara vondrona hydroxyl miaraka amin'ny fanampian'ny activator, izany hoe 5-ethylthiotetrazole na 4, 5-dicyanoimidazole, mamorona ny phosphitetriester (III), ary nahatsapa ny Coupling dingana.Ny dingana Capping dia atao mba hanakanana ny vondrona hydroxyl tsy mihetsika mandritra ny dingana fampiraisana, mba hampihenana ny fiforonan'ny filaharana tsy ilaina.Farany, ny phosphitetriester (III) tsy miorina (III) dia oxidized amin'ny phosphortriester stable simika (V) miaraka amin'ny iode ho oxidant amin'ny pyridine ankehitriny.

Ny ADN synthesized dia mety ho tapaka avy amin'ny fanohanana mafy amin'ny aminolysis, ny vondrona 2-cyanoethyl voaaro amin'ny phosphortriester ary ny amide amin'ny nucleobase dia tapaka miaraka amin'izay koa, ny Synthesis Plates sy Synthesis Columns ao amin'ny racks dia apetraka mivantana ao amin'ny efitrano fanehoan-kevitra. nyFitaovana deprotection.Ny ADN crude dia azo omanin'ny HPLC, electrophoresis ary OPC amin'ny fangatahana, afaka manome anao ihany koa izahayFitaovana fanadiovanaho an'ny Post-processing.